Injecao subcutanea: a tecnica no laboratorio de investigacao
Dr. Sieglinde Klaus
Equipa de redação científica · Bergdorf Bioscience
Dr. Sieglinde Klaus
Equipa de redação científica · Bergdorf Bioscience
A injecao subcutanea designa, no contexto de investigacao, a introducao de uma solucao reconstituida na camada de tecido adiposo sob a pele de um organismo-modelo. No laboratorio, este procedimento e feito com seringas de insulina finas (29G a 31G), em condicoes assepticas, com uma prega cutanea definida e rotacao sistematica dos locais. Este guia descreve a tecnica exclusivamente como manuseamento de material de investigacao, e nao como instrucoes para a autoadministracao em seres humanos.
Subcutaneo (s.c.) designa a administracao no tecido conjuntivo e adiposo frouxo situado diretamente sob a derme, acima da fascia muscular. Esta camada e pouco irrigada em comparacao com o musculo, razao pela qual as substancias passam para o leito capilar de forma mais lenta e uniforme. No contexto pre-clinico, a via subcutanea e um modelo estabelecido para caracterizar a cinetica de absorcao de peptidos e proteinas.
A absorcao a partir do deposito subcutaneo e lenta e, muitas vezes, incompleta: parte da substancia e captada pelo sistema linfatico, parte e degradada no espaco intersticial ou por enzimas locais antes de atingir a circulacao (Richter & Jacobsen, 2014). Daqui resulta tipicamente uma concentracao maxima (Cmax) mais baixa, com uma duracao de acao prolongada em comparacao com a administracao intramuscular.
A velocidade de absorcao depende fortemente da regiao de injecao. Em conjuntos de dados farmacocineticos clinicos, sao sobretudo os peptidos com absorcao rapida (Tmax inferior ou igual a 2 horas) e elevada depuracao que reagem de forma sensivel a escolha do local de injecao (Zou et al., 2021). Por isso, para obter dados de investigacao reproduziveis, e decisivo seguir um protocolo padronizado e documentado. Antes da injecao, a solucao deve estar corretamente reconstituida; encontra os pormenores no guia Reconstituir peptidos.
Para as aplicacoes subcutaneas no laboratorio, as seringas de insulina com canula fixa integrada sao o padrao. O calibre da agulha indica-se em Gauge (G), sendo que um valor mais elevado significa um diametro exterior mais fino: 29G corresponde a cerca de 0,33 mm, 30G a cerca de 0,30 mm e 31G a cerca de 0,25 mm. Estas canulas finas criam um canal de puncao pequeno e reduzem o trauma do tecido, bem como o refluxo.
As agulhas mais finas estao associadas a um menor estimulo doloroso. Num estudo controlado sobre a insercao cutanea de agulhas, a frequencia de puncoes dolorosas aumentou de forma significativa com o diametro exterior: as agulhas de 23G provocaram dor em 63 por cento das insercoes, enquanto as de 32G apenas em 31 por cento (p inferior a 0,0001) (Arendt-Nielsen et al., 2006). Este resultado fundamenta a escolha das canulas mais finas possiveis no modelo animal.
Quanto ao aspirar da solucao, vale a regra: dosear os volumes com exatidao, de acordo com o calculo. A calculadora de peptidos ajuda na conversao da concentracao e da quantidade-alvo em unidades da escala de insulina. As bolhas de ar removem-se dando pequenas pancadas no cilindro e expulsando-as com cuidado, antes de a agulha alcancar a prega cutanea. Uma canula de aspiracao separada e mais grossa pode poupar a agulha s.c. fina no momento da puncao, mas, na pratica de rotina com seringas de insulina, geralmente nao esta prevista.
A prega cutanea (pinch) levanta o tecido subcutaneo, separando-o da musculatura subjacente, e cria um deposito definido. Para isso, a pele e suavemente levantada com o polegar e o indicador, sem agarrar o musculo. Com a prega levantada, a agulha e introduzida num angulo de 45 a 90 graus, consoante o seu comprimento.
O comprimento da agulha determina o angulo: as agulhas curtas (4 mm) podem ser colocadas na vertical (90 graus) com a prega cutanea levantada, ao passo que as canulas mais longas exigem frequentemente um angulo mais plano, de cerca de 45 graus, para nao perfurar a fascia muscular. As recomendacoes FITTER identificam as agulhas mais curtas (4 mm para caneta, 6 mm para seringa) como seguras e eficazes e sublinham que se deve evitar uma colocacao intramuscular involuntaria, ja que esta acelera a cinetica de absorcao e aumenta a variabilidade (Frid et al., 2016).
A profundidade de penetracao e relevante porque a composicao e a espessura do tecido influenciam a captacao. Em modelos obesos, uma agulha demasiado curta pode colocar o material, por engano, de forma demasiado superficial, ao passo que uma agulha demasiado longa atinge o musculo (Erstad & Barletta, 2022). Apos a puncao, o embolo e esvaziado de forma uniforme e completa; a prega cutanea mantem-se segura durante a injecao e so e libertada depois de a agulha permanecer brevemente no local.
A injecao repetida no mesmo local altera o tecido subcutaneo e provoca lipo-hipertrofia, ou seja, um espessamento e endurecimento do tecido adiposo. A partir dessas zonas, a absorcao e atenuada e fortemente variavel, o que falseia os valores farmacocineticos e destroi a comparabilidade entre os ensaios.
Os dados sao inequivocos: numa coorte de 372 participantes com diabetes tipo 1, apenas 26,8 por cento das pessoas que faziam rotacao de forma consequente desenvolveram lipo-hipertrofia, contra 83,9 por cento sem rotacao; a ausencia de rotacao aumentou o risco em 6,3 vezes (Barola et al., 2018). Os autores chamam a atencao para o facto de a absorcao atenuada e variavel a partir de locais lipo-hipertroficos conduzir a variabilidade glicemica, um analogo direto da dispersao dos dados na investigacao.
Na pratica, isto significa: um esquema de rotacao documentado ao longo de varias zonas distintas, com uma distancia de pelo menos alguns centimetros entre puncoes consecutivas. Cada local utilizado e registado, de modo que nenhuma zona seja novamente sujeita a carga antes da sua recuperacao completa. Assim, a formacao do deposito e as condicoes de absorcao mantem-se constantes ao longo de toda a serie de ensaios.
Para alem do local de injecao, varios fatores fisiologicos e fisicos modulam a captacao a partir do deposito subcutaneo. Uma revisao sistematica aponta a regiao, a irrigacao local, a temperatura, a concentracao da substancia e a atividade fisica como principais determinantes (Gradel et al., 2018).
A irrigacao (subcutaneous blood flow) e central: um aumento da irrigacao recruta capilares adicionais, amplia a area de troca e acelera a captacao. A temperatura atua no mesmo sentido. Na revisao citada, o aquecimento do local de injecao para 40 graus Celsius reduziu em 42 por cento o tempo ate a concentracao plasmatica maxima de insulina aspart. A atividade fisica do organismo-modelo aumenta a perfusao regional e, com ela, igualmente a velocidade de absorcao.
A concentracao da solucao comporta-se de forma inversa: concentracoes mais elevadas tendem a abrandar a captacao. A obesidade atrasa a absorcao devido a uma menor densidade capilar. Para obter dados de investigacao reproduziveis, estas variaveis devem ser controladas, por exemplo atraves de uma temperatura ambiente constante, de uma concentracao definida e de regioes uniformes. Alem disso, o armazenamento da solucao influencia a sua integridade; encontra indicacoes a esse respeito em Armazenar peptidos.
O trabalho assetico protege tanto a integridade da substancia de investigacao como o modelo contra reacoes locais. A pratica padrao inclui a desinfecao da membrana do frasco (vial) e do local da pele com um toalhete embebido em alcool a 60 a 70 por cento, seguida de um tempo de secagem suficiente. So depois de o alcool se ter evaporado por completo e que se faz a puncao, ja que o alcool humido no canal de puncao intensifica a ardencia e pode irritar a substancia.
A evidencia quanto a necessidade imperativa da desinfecao com alcool antes de cada injecao subcutanea e mista; varias revisoes nao encontraram um risco acrescido de infecao em condicoes limpas quando se prescindiu do alcool. Ainda assim, o trabalho assetico no laboratorio e considerado boa pratica, sobretudo no caso de frascos de utilizacao multipla. Cada agulha e usada apenas uma vez: a reutilizacao embota a ponta, aumenta a resistencia do tecido e o risco de contaminacao.
Outras regras fundamentais: usar luvas, trabalhar sobre uma superficie de trabalho desinfetada, nao pousar seringas abertas e nao recolocar a tampa em nenhuma canula, para evitar lesoes por puncao. A membrana dos frascos de utilizacao multipla e novamente limpa antes de cada aspiracao. Estas rotinas mantem baixa a carga microbiana e garantem que os efeitos observados se devem efetivamente a substancia, e nao a contaminacao.
A aplicacao subcutanea e a intramuscular (i.m.) distinguem-se fundamentalmente no perfil de absorcao e no caso de utilizacao. O tecido muscular e claramente mais irrigado do que a camada de tecido adiposo sob a pele, razao pela qual a administracao i.m. de solucoes aquosas costuma ter um inicio de acao mais rapido, gerar picos mais elevados e uma duracao de acao mais curta.
Em contrapartida, a via subcutanea fornece um perfil lento e sustentado, com Cmax mais baixo e uma fase de absorcao mais longa, porque a substancia permanece na gordura pouco vascularizada e difunde-se gradualmente (Richter & Jacobsen, 2014). Para peptidos e proteinas, esta e muitas vezes a via-modelo preferida, ja que as moleculas grandes sao adicionalmente captadas pelo sistema linfatico.
Decisivo para a metodologia: uma colocacao i.m. involuntaria, quando o objetivo era subcutaneo, falseia consideravelmente os dados, porque acelera o inicio de acao. E precisamente por isso que as recomendacoes FITTER realcam as agulhas curtas e a tecnica da prega cutanea, para evitar com seguranca a fascia muscular (Frid et al., 2016). Em modelos obesos, o comprimento da agulha e particularmente critico, ja que sao possiveis colocacoes erradas em ambos os sentidos (Erstad & Barletta, 2022).
As canulas e seringas usadas sao objetos cortantes e contaminados (sharps) e devem, sem excecao, ir para um contentor de cortantes resistente a perfuracao e que possa ser fechado. Este e disponibilizado imediatamente junto ao posto de trabalho, de modo que a agulha possa ser eliminada logo apos a utilizacao, sem pousos intermedios.
A regra mais importante para evitar lesoes por puncao de agulha e: nao recolocar a tampa. A recolocacao da tampa protetora e uma das causas mais frequentes de lesoes acidentais por puncao. A seringa completa, incluindo a canula, e eliminada como uma unidade. O contentor nao e enchido para alem da marca de enchimento, ja que os contentores demasiado cheios aumentam o risco de lesao no momento do fecho.
A eliminacao do contentor cheio e fechado segue as normas locais para residuos biologicos e medicos da respetiva instituicao. Os frascos vazios, os toalhetes e as embalagens sao separados de acordo com a diretriz de residuos do laboratorio. Uma documentacao sem lacunas do lote, da data e do material utilizado completa o protocolo e assegura a rastreabilidade necessaria para a documentacao de investigacao.
Uma lista de verificacao compacta garante a reprodutibilidade em todos os ensaios. Antes de comecar: solucao corretamente reconstituida e verificada quanto a clareza, volume determinado atraves da calculadora de peptidos, seringa de insulina (29G a 31G) pronta, contentor de cortantes ao alcance, superficie de trabalho e luvas preparadas.
Durante a aplicacao: membrana do frasco e local desinfetados e secos, bolhas de ar removidas, prega cutanea levantada, agulha colocada no angulo adequado (45 a 90 graus consoante o comprimento), embolo esvaziado de forma uniforme, agulha mantida brevemente no local, prega libertada. Local escolhido e registado de acordo com o esquema de rotacao, com distancia suficiente em relacao ao local anterior.
Depois da aplicacao: canula diretamente para o contentor de cortantes sem recolocar a tampa, material documentado, superficie de trabalho desinfetada. Variaveis de controlo como a temperatura e a concentracao mantidas constantes. Esta rotina minimiza o trauma, a contaminacao e a dispersao dos dados. Constitui o esqueleto metodologico para dados de absorcao pre-clinicos solidos e complementa os guias sobre Reconstituir peptidos e Armazenar peptidos.
Para as aplicacoes subcutaneas, sao habituais as seringas de insulina de 29G a 31G. Valores de Gauge mais elevados significam agulhas mais finas e estao associados a um menor trauma do tecido e a um menor estimulo doloroso (Arendt-Nielsen et al., 2006).
A prega cutanea separa o tecido adiposo do musculo e cria um deposito subcutaneo definido. Isto evita uma colocacao intramuscular involuntaria, que aceleraria a absorcao e aumentaria a variabilidade dos dados (Frid et al., 2016).
Cada local so deve ser novamente utilizado apos a sua recuperacao completa. Numa coorte, a ausencia de rotacao aumentou o risco de lipo-hipertrofia em 6,3 vezes e conduz a uma absorcao atenuada e variavel (Barola et al., 2018).
O trabalho assetico e considerado boa pratica de laboratorio. A evidencia quanto a necessidade imperativa antes de cada injecao subcutanea e mista; ainda assim, recomenda-se desinfetar o frasco e o local com a respetiva secagem posterior, sobretudo no caso de frascos de utilizacao multipla.
Sim. O aquecimento do local de injecao para 40 graus Celsius reduziu em 42 por cento o tempo ate a concentracao plasmatica maxima de insulina aspart (Gradel et al., 2018). Por isso, as condicoes constantes sao importantes para obter dados reproduziveis.
Apenas para fins de investigacao. Nao se destina ao consumo humano. For research purposes only. Not for human consumption.
Redacao cientifica: Dr. Sieglinde Klaus
